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    勁馬生物|蛋白質分離純化的幾種方法

    發布時間: 2022-05-13  點擊次數: 65次

      分離提純某一種蛋白質時,首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來并保持原來的天然狀態,不喪失活性。所以要采用適當的方法將組織和細胞破碎。


    一、常用的破碎組織細胞的方法有:

    1.機械破碎法

    這種方法是利用機械力的剪切作用,使細胞破碎。常用設備有,高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。


    2.滲透破碎法

    這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。


    3.反復凍融法

    生物組織經凍結后,細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便,但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。


    4.超聲波法

    使用超聲波震蕩器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。




    二、蛋白質分離純化抽提

    通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100 等),使膜結構破壞,利于蛋白質與膜分離。在抽提過程中,應注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質的變性。



    三、蛋白質粗制品的獲得

    選用適當的方法將所要的蛋白質與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法:


    1.等電點沉淀法

    不同蛋白質的等電點不同,可用等電點沉淀法使它們相互分離。


    2.鹽析法

    不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來的蛋白質仍保持其天然性質,并能再度溶解而不變性。


    3.有機溶劑沉淀法

    中性有機溶劑如乙醇、丙酮,它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉淀出來,因此可用來沉淀蛋白質。此外,有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層,促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由于有機溶劑會使蛋白質變性,使用該法時,要注意在低溫下操作,選擇合適的有機溶劑濃度。


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